Изготовление микропипеток на оборудовании Narishige 

Микропипетки для биологических экспериментов изготавливаются из стеклянных заготовок-капилляров различного диаметра. Главный инструмент — пуллер пипеток позволяет произвести вытягивание капилляра с уменьшением его диаметра и жестким разрывом в самом тонком месте. Основные операции по изготовлению пипеток выглядят следующим образом:

Для различных целей требуется произвести разное количество операций по обработке микропипеток с помощью того или иного оборудования, например:

Для удержания клеток

Типичное применение: удержание ооцита млекопитающего.

Подходящие инжекторы: IM-11-2/IM-HD1/IM-HD1T

Характеристики:

• удерживает сферический мягкий образец;
• удерживает плавающую клетку с минимальными повреждениями.

Для инъекций ИКСИ

 

Типичное применение: ICSI/ES-клеточная инъекция/ биопсия и т.д.

 

Подходящие инжекторы: IM-11-2/IM-21

Характеристики:

• острый наконечник для прокола с минимальным повреждением;
• наконечник имеет широкое отверстие и способен проколоть образец.

Для инъекции ДНК

 

Типичное применение: ДНК-инъекция/ РНК-инъекция и т.д.

 

Подходящие инжекторы: IM-400/IM-21/IM-11-2 *

Характеристики:

• универсальный микроинструмент для введения небольшого количества жидкости, например, для переноса генов и введения вирусов;
• наконечник можно раздавить, ударив вытянутый (PC-100) капилляр о пинцет или дно чашки Петри.

* Пневматический IM-11-2 может не подойти в зависимости от размера наконечника пипетки.

Для патч-клампа

Типичное применение: Цельноклеточный патч-кламп

Рекомендуемый стеклянный капилляр: GD-1.5

Характеристики:

• стандартные пипетки однородной формы с отверстием в наконечнике около 1,5 мкм OD.

Для инъекций в мозг

Типичное применение: инъекция в мозг.

Характеристики:

• наконечник имеет длинную конусность (40 мкм OD);
• инъекция с меньшей инвазивностью;предотвращение засорения наконечника.

Для внутриклеточной записи

Типичное применение: внутриклеточная запись.

Рекомендуемый стеклянный капилляр: GD-2.

Характеристики:

• длинная игла с коротким тонким наконечником, достаточно прочная, чтобы проколоть клетки.

Микропипетки также изготавливаются для:

• растягивания мышечной ткани;
• забора жидкости/клеток;
• нанесения/введения стимулятора;
• взятия образцов;
• тетрадного анализа и др.

Выбор капилляра-заготовки

Перед изготовлением микропипетки важно правильно выбрать капилляр-заготовку.

Без филамента/с филаментом

Капилляр с филаментом подходит, когда наконечник пипетки меньше 1 мкм. При этом пипетка должна использоваться для нагнетание жидкости, так как это ослабляет тенденцию к капиллярному действию.

*Нет никакой разницы в упругости между капиллярами с нитью и без нити.

Толщина стенки капилляра

При выборе капилляра учитывайте, что чем толще стенки, тем более упругим будет дозатор, и, чем тоньше стенка, тем меньше повреждений наносится образцу.

Стеклянный стержень

Используется для создания инструмента с твердым наконечником, не предназначенного для работы под давлением, например, аспирации или инъекции.

Таблица типов стеклянных капилляров-заготовок

	G-1	G-1.2	G-1.5	GD-1	GD-1.2	GD-1.5	GC-1	GC-1.2	GC-1.5	GDC-1	GDC-1.2	GDC-1.5	G-100	G-100L	G-1000
Наружный диаметр (мм)	1	1.2	1.5	1	1.2	1.5	1	1.2	1.5	1	1.2	1.5	1	1	1
Внутренний диаметр (мм)	0.6	0.75	0.9	0.6	0.75	0.9	0.6	0.75	0.9	0.6	0.75	0.9	0.75	0.75	-
Длина	90*						90						90*	100*	-
Кол-во	500						200						500		90*
Тип	Боросиликатное стекло														200

* Стекло поставляется по индивидуальному заказу: длина от 70 до 180 мм - по запросу.

Оборудование Narishige для изготовления микропипеток

Для вытягивания капиллярных заготовок можно использовать один из следующих пуллеров Narishige.

PC-100

Универсальный вертикальный пуллер PC-100, использующий вес для вытягивания капилляра, способен создать микропипетку для инъекции и/или микроэлектрод для патч-клампа. Выберите одно- или двухступенчатое вытягивание и отрегулируйте уровень нагревателя для создания подходящего конуса.

PE-22

PE-22 - вертикальный пуллер, который использует как вес, так и силу магнита для вытягивания одиночного капилляр наружным диаметром 2-3 мм, или многоствольного (до 7) с наружным диаметром 1 мм.

MF2 

Для обрезки, полировки, изгиба и изготовления шипов можно использовать микрокузницу Narishige MF2.

MF2 – микрокузница мирового стандарта, используемая для изготовления пипеток под микроскопом. Уровень нагревателя можно регулировать, а пипетка может подходить к нагревателю под любым углом (360 градусов).

Все линзы являются дополнительными и выбираются из наборов линз (MF2-LS1 или MF2-LS2).

EG-402

Для шлифовки можно использовать микрошлифовальный станок Narishige EG-402.

Отшлифуйте кончик пипетки, контролируя его под микроскопом для высокой точности, и с помощью влажного точильного камня получите острый скос.

Оборудование других производителей

Компания Sutter Instrument производит высокоточные горизонтальные пуллеры микропипеток с лазерным нагревом и фунциями программирования (например, модель P2000). Мукрокузница CPM-2 другого производителя (ALA Scientific Instruments) позволяет наносить покрытие и полировать пипетки с высокой точностью. 

Смотрите также другое оборудование для изготовления микропипеток в нашем каталоге.

Топ-3 причины сделать свои собственные микропипетки

1. Создайте идеальную форму!

Эксперт нуждается в специальном изготовлении на самом высоком уровне.

Правильная форма пипетки, соответствующая инжектору, объекту эксперимента, размеру образца, типу раствора — залог успешного результата. После освоения техники можно регулировать отверстие наконечника на 1 мкм, используя при этом метод разбивания наконечника на чашке Петри или раздавливания пинцетом, что часто создает грубое и неравномерное по размеру отверстие наконечника.

2. Ежедневный эксперимент требует большого количества пипеток, а предварительно изготовленные стоят значительно дороже.

Сохраняйте низкую стоимость.

Мы предлагаем различные типы стеклянных капилляров, подходящих для каждого эксперимента. Сделайте свои собственные пипетки и избавьтесь от ненужных затрат на готовые.

3. Многие производители готовых пипеток используют для производства микроформу Narishige Microforge.

Narishige является ведущей компанией по производству инструментов для изготовления микропипеток.

Инструменты для производства пипеток Narishige используются лабораториями и компаниями по производству пипеток по всему миру. Освоив навыки, описанные в данной статье, каждый может изготавливать пипетки так же или даже лучше, чем коммерчески доступные готовые пипетки.

Расходные материалы и дополнительные принадлежности Narishige

Модель	Продукт	Описание	Количество	Применяемые продукты
MF2-LS1	Набор объективов 50x/100x	5x, 10x Линза объектива 10-кратный окуляр 10-кратный окуляр с микрометром	1 комплект	MF2 Увеличения: 50x и 100x
MF2-LS2	Набор объективов 75x/525x	5x, 35x Линза объектива 15-кратный окуляр 15-кратный окуляр с микрометром	1 комплект	MF2 Увеличения: 75x и 525x
MF2-LE15	Набор окуляров 15x	15-кратный окуляр 15-кратный окуляр с микрометром	1	MF2
MF2-LO35	Объектив 35x	Объектив 35x	1	MF2
PC-10H	Нагреватель	Проволочный нагреватель	5	PC-10, PC-100
PE-21HA	Прямой нагреватель	Прямой проволочный нагреватель	3	PE-21, PE-22
PE-21HB	Змеевиковый нагреватель для PE-21/PE-22	Проволочный нагреватель (внутренний диаметр ø3 мм)	3	PE-21, PE-22
PE-21HC	Змеевиковый нагреватель для PE-21/PE-22	Проволочный нагреватель (внутренний диаметр ø5 мм)	3	PE-21, PE-22
PE-21HD	Змеевиковый нагреватель для PE-21/PE-22	Проволочный нагреватель (внутренний диаметр ø7 мм)	3	PE-21, PE-22
PT-A	Платиновый нагреватель	ø100um × 300 мм	1 ролл	MF2
PT-B	Платиновый нагреватель	ø150um × 300 мм	1 ролл	MF2

* Технические характеристики вышеуказанных изделий могут быть изменены без предварительного уведомления.